2 × Taq Platinum PCR Mix
Danasîna Çalakiyê
1 yekîneya (U) Taq Platinum DNA Polymerase çalakî wekî mîqdara enzîmê ku tê de 10 nmol deoksînukleotîdên ku di nav asîdê de nayên çareser kirin di 74 ° C de di nav 30 hûrdeman de bi karanîna DNA sperma salmonê ya çalakkirî wekî şablon/destpêk tê destnîşan kirin.
Kontrolkirina Kalîteyê
Paqijiya bi tespîtkirina SDS-PAGE ji%99 zêdetir e; Na çalakîya nukelese ya xerîbkî tesbît beno; Di genoma mirovan de genê yek-kopî bi bandor dikare were zêdekirin; Dema ku yek hefte li germahiya odeyê were hilanîn çalakîyek girîng nayê guheztin.
Parametreyên Teknîkî yên Sereke
Ew 5′-3 activity çalakiya exonuclease û 3′-5 ′ çalakiya exonuclease heye, û dilsoziya wê li tenişta Pfu polymerase ye. Leza dirêjkirina Taq Platinum Polymerase ji Pfu polymerase zûtir e û karbidestiya amplifikasyonê bilindtir e. Berhemên PCR dikarin rasterast bi dawiya xalîçê ve bêne girêdan an bi vektora TA -yê werin klon kirin. Ger pêdivî ye ku karîgeriya klonkirinê were baş kirin, tê pêşniyar kirin ku pêşî were paqij kirin û berî ku di vektora TA-yê de were klînekirin pêlên 3'-dA lê zêde bike.
One-tube Taq Platinum MasterMix (Sertîfîkaya Hilbera Teknîkî ya Neteweyî)
■ Taq Platinum MasterMix taybetmendî û hesasiyeta reaksiyona PCR çêtir kiriye û dikare şablonên tevlihev ên bi naveroka GC -ya bilind, avahiya duyemîn û yên wekî wan zêde bike. Bi qasî 2 nusxeyên şablona mebest dikarin werin zêdekirin, encamên ezmûnî yên rasttir misoger dikin.
Formula Formula bêhempa ya Taq Platinum MasterMix tevahiya pergala reaksiyonê pir aram dike, û çalakî ji ber serma-qelandin an hilanîna demdirêj a li 4 ° C nayê bandor kirin.
Solution Çareseriya têkel a PCR ya pêş-amade û bikêr û bikêr dikare operasyonê zû û hêsan bike, giraniya kedê û xeletiya mînakkirinê pir kêm dike. Pêşkêşker û xweşbîniya PCR-ya bi performansa bilind jî di nav tevliheviyê de ne, ku hewcedariyên li ser mercên PCR kêm dike.
■ Di vê hilberê de hem pergalên ku tê de reng û hem jî boyax hene hene. Berhemên MasterMix-ên ku xwedî boyax in dikarin rasterast piştî PCR-ê, bêyî ku tamponek barkirinê lê zêde bikin, bi elektroforîzekirinê werin xebitandin.
Applications
Ew dikare polîmeraza Pfu biguhezîne da ku hilberên dilsoziya bilind ji şablonên tevlihev ên wekî genom zêde bike, û ew ji bo serîlêdanên wekî klonkirina genên vegotinê, mutasyonên malper-taybetî û analîzkirina polymorfîzma yek nucleotide (SNP), hwd.
Di Sêwirana Destpêkên PCR -ê de Tedbîr:
Dirêjahiya destpêker bi gelemperî 20-25 mer e. Lêbelê, dema ku PCR perçeyek dirêj tê meşandin, divê dirêjahiya pêşîn li 30-35 mer zêde bibe.
Between Di navbera her du destpêkan de hevberkirinek bêkêmasî tune, nemaze ji bo 3 bingehên paşîn ên li dawiya 3.
Content Divê naveroka GC ji%50-60 be, û ji GC an AT-ya herêmî ya herêmî dûr bikevin. Ji bo ku destpêk û şablon bi zexmî were girêdan, di dawiya 3 de ji avahiya dewlemend a AT dûr bikevin.
Ji destpêkerê dûr bikevin da ku avahiya duyemîn çêbike.
Two Du destpêkên bi germahiya Tm nêzî hev hilbijêrin.
Hesabkirina Nirxa Tm ya Destpêkan ji bo PCR:
■ Dema ku destpêker ji 20 merî kêmtir be: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ Dema ku destpêker ji 20 merî zêdetir e: Tm = 81.5+0.41 (GC%)-600/L, ku L dirêjahiya destpêkerê ye.
Temperature Germahiya germkirinê li (Tm-5) ° C bicîh bikin.
PCR Primer Input
Berhevoka dawîn a guncan a destpêkeran dikare di navbera 0.1 μM û 1.0 μM de were hilbijartin. Kêmasiyek destpêkek pir kêm dibe sedema berhema kêm a hilberên amplifikasyonê, di heman demê de berhevokek destpêkek pir zêde meyldarê zêdebûna ne-taybetî ye. Bi gelemperî, dema ku mîqyasa DNAya şablonê DNAya şablonê mezin an tevlihev e (wek DNAya genoma mirovan) wekî şablon tê bikar anîn, divê berhevoka pêşîn kêmtir be. Gava ku mîqyasa DNAya şablonê ADN -ya şablonê piçûk an hêsan be (mînak, DNAya plasmîdê, hwd.) Wekî şablon tê bikar anîn, divê berhevoka pêşîn zêdetir be.
Hemî hilber dikarin ji bo ODM/OEM -ê bêne xweş kirin. Ji bo hûragahiyan,Ji kerema xwe Xizmeta Taybetkirî (ODM/OEM) bikirtînin
  |
DNA -ya genomîkî wekî şablon bikar bînin ku perçeyek 1 kb zêde bikin. Piştî reaksiyona PCR, ji bo tespîtkirina electrophoresis 5 μl bigirin. |
A-1 pablon
■ Di şablonê de qirêjiyên proteînê an astengkerên Taq, û hwd hene. —— lateablona DNA paqij bikin, qirêjiyên proteînê rakin an DNA şablonê bi kîtên paqijkirinê derxînin.
■ Denaturkirina şablonê ne temam e —— Bi guncanî germahiya denaturasyonê zêde bike û dema denaturationê dirêj bike.
Deg Xerabkirina şablonê —— theablon ji nû ve amade bikin.
A-2 Destpêk
Quality Kalîteya nebaş a destpêkan-—Pêşînokê ji nû ve sentez bikin.
Deg Hilweşîna seretayî —— Ji bo parastinê serekên berhevkirî yên bilind bihejmêrin. Ji cemidandin û cemidandina pirjimar an jî dirêj-dirêj 4 ° C sarincokê biparêzin.
Design Sêwirana ne rast a destpêkan (mînak. Dirêjahiya destpêkerê têrê nake, dimer di navbera destpêkan de çêdibe, hwd.)
A-3 Mg2+lisersekinî
■ Mg2+ konsantrasyon pir kêm e - —Bi rast Mg zêde bikin2+ konsantrasyon: Mg Optimize bikin2+ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn2+ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.
A-4 Germahiya Annealing
Temperature Germahiya bilind alandinê bandorê li girêdana destpêk û şablonê dike. —— Germahiya anînê kêm bikin û bi germahiyek 2 ° C şertê xweş bikin.
A-5 Dema dirêjkirinê
Extension Demjimêra dirêjkirina kurt —— Dema dirêjkirinê zêde bikin.
Fenomen: Nimûneyên neyînî jî bendên rêzika hedef nîşan didin.
A-1 Qirêjiya PCR
Cont Qirêjiya rêzika hedef an hilberên zêdekirinê —— Bi baldarî nimûneya ku tê de rêzika armancê di mînaka neyînî de tê pîp kirin an wan ji lûleya santrîfûjê dernexe. Pêdivî ye ku reaktîv an alav werin autoklav kirin da ku asîdên nukleîk ên heyî ji holê rakin, û divê hebûna enfeksiyonê bi ceribandinên kontrola neyînî were destnîşan kirin.
Cont Qirêjiya reaksiyonê —— Reagentan hilînin û li germahiyek nizm hilînin.
A-2 Serokwezîrr
■ Mg2+ konsantrasyon pir kêm e - —Bi rast Mg zêde bikin2+ konsantrasyon: Mg Optimize bikin2+ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn2+ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.
Design Sêwirana seretayî ya nerast, û rêzika armanc bi rêzika ne-hedef re homolojî heye. —— Serenavên ji nû ve sêwirandin.
Fenomena: Zencîreyên bihêzkirina PCR-ê bi mezinahiya ku tê hêvî kirin re nakok in, an mezin an piçûk, an carinan hem bandên zêdebûnê yên taybetî û hem jî bandên bihêzbûnê yên ne-taybetî çêdibin.
A-1 Destpêk
. Taybetmendiya seretayî ya belengaz
—— Serenavê ji nû ve sêwirandin.
Concentration Berhevkirina seretayî pir zêde ye ——Bi rast germahiya denaturasyonê zêde bikin û dema denaturationê dirêj bikin.
A-2 Mg2+ lisersekinî
■ The Mg2+ konsantrasyon pir zêde ye —— Bi rast Mîqdara Mg2+ kêm bikin: Mg xweş bikin2+ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn2+ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.
A-3 Thermostable polymerase
Amount Hejmara zêde ya enzîmê —— Mêjera enzîmê bi rêkûpêk bi navberên 0.5 U kêm bikin.
A-4 Germahiya Annealing
Temperature Germahiya germkirinê pir nizm e —— Bi guncanî germahiya germkirinê zêde bikin an jî rêbaza vekirina du-qonaxî bicîh bînin
Çerxên A-5 PCR
Many Zêde dewreyên PCR —— Hejmara dewreyên PCR kêm bikin.
A-1 Destpêk—— Taybetmendiya belengaz —— Destpêkê ji nû ve dîzayn bikin, cîh û dirêjahiya pêşîn biguhezînin ku taybetmendiya wê zêde bikin; an PCR -a hêlînkirî pêk bînin.
A-2 Temablon DNA
—— tempablon ne paqij e —— lateablon paqij bikin an DNA bi kîtên paqijkirinê derxînin.
A-3 Mg2+ lisersekinî
——Mg2+ konsantrasyon pir zêde ye —— Bi rast Mg kêm bikin2+ konsantrasyon: Mg Optimize bikin2+ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn2+ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.
A-4 dNTP
—— Kêmasiya dNTP -ê pir zêde ye —— Kêmasiya dNTP -ê bi guncan kêm bikin
A-5 Germahiya germkirinê
—— Germahiya vezelînê pir nizm —— Bi awayekî guncaw germahiya vezelînê zêde bikin
Çerxên A-6
—— Pir dewr —— Hejmara dewrê xweş bike
Gava yekem ev e ku hûn polîmeraza guncan hilbijêrin. Polîmeraza Taqê ya birêkûpêk ji ber nebûna çalakiya 3'-5 'exonukleazê nikare rast bike, û hevnegirî dê bandorkeriya dirêjkirina perçeyan pir kêm bike. Ji ber vê yekê, polîmeraza birêkûpêk a Taq nikare perçeyên armancê yên ji 5 kb mezintir bi bandor zêde bike. Polîmeraza Taq a bi guheztina taybetî an polimeraza din a dilsoziya bilind divê were hilbijartin da ku karîgeriya dirêjkirinê baştir bike û hewcedariyên amplifikasyona perçeyek dirêj bicîh bîne. Digel vê yekê, zêdekirina perçeyên dirêj jî pêdivî bi sererastkirina sêwirana seretayî, dema denaturation, dema dirêjkirinê, pH tampon, hwd. Ji bo ku pêşî li zirara şablonê were girtin, divê demjimêra guherînê di 94 ° C de ji bo çerxekê 30 sec an kêmtir were kêm kirin, û dema ku germahî heya 94 ° C berî zexmkirinê divê ji 1 min kêmtir be. Wekî din, sazkirina germahiya dirêjkirinê li dor 68 ° C û sêwirandina dema dirêjkirinê li gorî rêjeya 1 kb/min dikare amplifikasyona bi bandor a perçeyên dirêj misoger bike.
Rêjeya çewtiya zêdebûna PCR dikare bi karanîna polimerazên cihêreng ên DNA -yê bi dilsoziyek bilind were kêm kirin. Di nav hemî polimerazên Taq DNA yên ku heya nuha hatine dîtin de, enzima Pfu rêjeya xeletiya herî kêm û dilsoziya herî zêde heye (li tabloya pêvekirî binêre). Digel vebijarka enzîmê, lêkolîner dikarin bi xweşkirina şert û mercên reaksiyonê, rêjeya mutasyona PCR jî kêm bikin, di nav de xweşbînkirina berhevoka tampon, giraniya polîmeraza thermostable û xweşkirina jimara PCR.
Kategoriyên hilberan
ÇIMA ME HILBIJARTIN
Ji damezrandina xwe ve, kargeha me bi rêzgirtina prensîbê re hilberên çîna yekem ên cîhanê pêşve xist
kalîteya yekem. Berhemên me di pîşesaziyê de navûdengê hêja û di nav xerîdarên nû û kevn de pêbaweriyek hêja wergirtiye ..
- Tel: +86 010-59822688
- Avahî 5, Hejmar 86, Shuangying West Road, Changping District, Pekîn.
- people@tiangen.com
