RNA Hêsan Hêlîn/Hucreya Hucreyê

A-1 Hucrekirin an homojenîzasyon ne bes e

---- Bikaranîna nimûneyê kêm bikin, mêjûya tîrêjê zêde bikin, homojenîzasyon û dema lîzê zêde bikin.

A-2 Hejmara nimûneyê pir mezin e

---- Mêjeya nimûneya ku tê bikar anîn kêm bikin an mêjûya tîrêjê zêde bikin.

A-1 Lîz an jî homojenîzasyona şaneyê têr nake

---- Bikaranîna nimûneyê kêm bikin, mêjûya tîrêjê zêde bikin, homojenîzasyon û dema lîzê zêde bikin.

A-2 Hejmara nimûneyê pir mezin e

---- Ji kerema xwe serî li kapasîteya pêvajoyê ya herî zêde bidin.

ARN-A-3 bi tevahî ji stûnê nayê derxistin

---- Piştî ku hûn ava RNase-Zêde lê zêde bikin, çend hûrdeman berî santrîfuzkirinê bihêlin.

A-4 Etanol di eluentê de

---- Piştî şuştinê, dîsa santrîfûj bikin û heta ku ji dest tê tampona şuştinê jê bikin.

Navgîniya çanda A-5 Cell bi tevahî nayê rakirin

---- Dema ku hucreyan berhev dikin, ji kerema xwe heya ku ji dest tê çanda navîn derxînin.

A-6 Hucreyên ku di RNAstore de têne hilanîn bi bandorker nayên santrîfûj kirin

---- Tîrbûna RNAstore ji navgîniya çanda navîn a hucreyê mezintir e; ji ber vê yekê divê hêza navendparêziyê bê zêdekirin. Tête pêşniyar kirin ku li 3000x g bê centrifûge kirin.

A-7 Di nimûneyê de naverok û pirbûna ARN-ya kêm

---- Nimûneyek erênî bikar bînin da ku hûn diyar bikin ka berhema kêm ji hêla nimûneyê ve hatî çêkirin.

A-1 Maddî ne teze ye

---- Pêdivî ye ku destmalên nû tavilê di nîtrojenê şil de bêne hilanîn an tavilê têkevin nav reagenta RNAstore da ku bandora derxistinê misoger bike.

A-2 Hejmara nimûneyê pir mezin e

---- Hejmara nimûneyê kêm bikin.

A-3 RNase contamination

---- Tevî ku tampona ku di kîtekê de tê peyda kirin RNase nagire, ew hêsan e ku meriv di pêvajoya derxistinê de RNase qirêj bike û divê bi baldarî were desteser kirin.

Qirêjiya A-4 Electrophoresis

---- Tampona electrophoresis biguhezînin û piştrast bikin ku xerç û Barkirina Buffer ji vegirtina RNase azad in.

A-5 Ji bo elektroforezê pir barkirin

---- Mûçeya barkirina nimûneyê kêm bikin, barkirina her bîrê divê ji 2 μg derbas neke.

Rêjeya A-1 Nimûne pir mezin e

---- Hejmara nimûneyê kêm bikin.

A-2 Hin mînak xwedî naveroka DNA-ya bilind in û dikarin bi DNase bêne derman kirin.

---- Dermankirina DNase ya RNase-Azad bi çareseriya RNA ya hatî bidestxistin re bikin, û RNA dikare rasterast ji bo ceribandinên paşîn ên piştî dermankirinê were bikar anîn, an jî ji hêla kîtên paqijkirina RNA ve bêtir were paqij kirin.

Ji bo şûşeyên cam, 4 demjimêran li 150 ° C tê pijandin. Ji bo konteynirên plastîk, di 0.5 M NaOH de 10 hûrdeman tê şûştin, dûv re bi ava RNase-ya bêkêmasî tê şuştin û dûvre jî steril dibin da ku RNase bi tevahî rakin. Reagent an çareseriyên ku di ezmûnê de têne bikar anîn, nemaze av, pêdivî ye ku ji RNase azad bin. Ji bo hemî amadekariyên reagent ava bê RNase bikar bînin (avê li şûşeyek şûşa paqij zêde bikin, DEPC li berhevoka dawîn a 0.1% (V/V) zêde bikin, şevekê bihejînin û otoklav bikin).