Efficiency Kêmbûna amplifikasyona bilind: Parçeyên DNA yên bi mezinahiyên cihêreng (ji 5 kb kêmtir) û jêder dikarin bi bandor bêne zêdekirin.
Sensitivity Hestiyariya bilind: Bi qasî 10 pg perçeyên armancê dikarin ji şablonên genomîkî werin zêdekirin.
Resistance Berxwedana stresê ya bilind: Ji bo şablonên bi naveroka nepakiya bilind ên wekî şablon/çanda bakteriyayî ya hişk, perçeya mebestê dikare bi hêsanî were zêdekirin. Çalakiya polîmerazê bi cemidandin û cemidandina dubare wê bandorê neke.
For Ji bo serlêdanan rehet: Pergala bertek bi hêsanî û bi lez hate amadekirin. Parçeya amplified 3-dawiya dA-serûpê heye, ku ji bo klonkirina TA rehet e.
Awa: Taq DNA polimeraz
Mînak: Tempablon/çanda bakterî ya paqijkirî/hişk-derxistî
Pablon: > 10 pg
Mezinahiya perçeyê: <5 kb
Serîlêdan: Zexmkirina PCR ya perçeyên DNA, nîşankirina DNA, dirêjkirina destpêker, diyarkirina rêzê, kifşkirina genê mezin, ezmûnên nîv-hejmarî yên PCR, tespîtkirina şopa DNA, hwd.
Hemî hilber dikarin ji bo ODM/OEM -ê bêne xweş kirin. Ji bo hûragahiyan,Ji kerema xwe Xizmeta Taybetkirî (ODM/OEM) bikirtînin
Figureikil 1. Temablonên ji çavkaniyên cihêreng bi rêzê ve ji hêla TIANGEN Taq MasterMix II û Taq Mix -a hevbeş ji Pêşkêşker TR ve hatin zêdekirin da ku berxwedana stresê ya reaksiyonan tespît bikin. Encam destnîşan dikin ku hilberên TIANGEN dikarin perçeyên armancê ji şablonên genomîkî yên xav û çanda bakteriyan zêde bikin, û berxwedana stresê ji ya Supplier TR çêtir e. A: tempablona genomîkî ya xav ji hêla TIANGEN TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit ve hatî derxistin. Prp/DN: Derxistina xav û tespîtkirina nimûneyên xwîna mirovan. Birinc: Derxistina xav û tespîtkirina nimûneyên birincê. B: Colony PCR. Parçeya PCR 700 bp ye. M: TIANGEN Nîşan III |
|
Ji bo şablonên ji çavkaniyên cihêreng û bi dirêjahiya cûda gerdûnîbûna baş Figureikil 2. Parçeyên jêderan û dirêjiyên cihêreng bi karanîna TIANGEN -ê hatin xurt kirin Taq MasterMix II (A) û gelemperî Taq Bi rêzê ve Hilberînerê TK (B), Pêşkêşker TR (C), Pargîdaniya V (D) û Pêşkêşker G (E) tevlihev dikin. Encam nîşan didin ku performansa berfireh a hilberên TIANGEN ji hêla jêhatîbûn, taybetmendî û gerdûnîbûnê ve çêtirîn e.M: TIANGEN Marker III1: tempablona DNAya genomîkî ya soyê (120 bp); 2-3: tempablona DNAya genomî ya birincê (694 bp, 2258 bp); 4: tempablona DNAya genomîkî ya pembû (200 bp); 5: Escherichia coli şablona DNA ya genomîk (2298 bp); 6-7: tempablona DNAya genoma mişk (1 kb, 2 kb); 8-10: tempablona DNA ya genomîk a rat (1 kb, 2 kb, 2080 bp); 11-18: tempablona DNA ya genoma mirovan (300 bp, 448 bp (GC%: 74.8%), 1100 bp, 750 bp, 1000 bp, 1090 bp (GC%: 70.4%), 2 kb, 4 kb) |
|
Hestiyariya bilind Figureikil 3. Rêjeyên cihêreng ên perçeyên DNA yên mêjî û mirovan bi karanîna TIANGEN -ê hatin zêdekirin Taq MasterMix II (A), asayî Taq Bi rêzê ve, Hilberînerê V (B) û Pêşkêşker TK (C) tevlihev bikin, da ku hestiyariya amplifikasyonê kifş bikin. Encam nîşan didin ku hilbera TIANGEN dikare perçeya hedefê ji şablona genomê bi qasî 0,01 ng zêde bike, û hesasiyeta wê ji ya hilberînerên V û TK çêtir e. M: TIANGEN Marker III, N: NTCTPelişta 1-8 : 200 ng, 100 ng, 50 ng, 20 ng, 10 ng, 1 ng, 0.1 ng, 0.01 ng. |
A-1 pablon
■ Di şablonê de qirêjiyên proteînê an astengkerên Taq, û hwd hene. —— lateablona DNA paqij bikin, qirêjiyên proteînê rakin an DNA şablonê bi kîtên paqijkirinê derxînin.
■ Denaturkirina şablonê ne temam e —— Bi guncanî germahiya denaturasyonê zêde bike û dema denaturationê dirêj bike.
Deg Xerabkirina şablonê —— theablon ji nû ve amade bikin.
A-2 Destpêk
Quality Kalîteya nebaş a destpêkan-—Pêşînokê ji nû ve sentez bikin.
Deg Hilweşîna seretayî —— Ji bo parastinê serekên berhevkirî yên bilind bihejmêrin. Ji cemidandin û cemidandina pirjimar an jî dirêj-dirêj 4 ° C sarincokê biparêzin.
Design Sêwirana ne rast a destpêkan (mînak. Dirêjahiya destpêkerê têrê nake, dimer di navbera destpêkan de çêdibe, hwd.)
A-3 Mg2+lisersekinî
■ Mg2+ konsantrasyon pir kêm e - —Bi rast Mg zêde bikin2+ konsantrasyon: Mg Optimize bikin2+ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn2+ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.
A-4 Germahiya Annealing
Temperature Germahiya bilind alandinê bandorê li girêdana destpêk û şablonê dike. —— Germahiya anînê kêm bikin û bi germahiyek 2 ° C şertê xweş bikin.
A-5 Dema dirêjkirinê
Extension Demjimêra dirêjkirina kurt —— Dema dirêjkirinê zêde bikin.
Fenomen: Nimûneyên neyînî jî bendên rêzika hedef nîşan didin.
A-1 Qirêjiya PCR
Cont Qirêjiya rêzika hedef an hilberên zêdekirinê —— Bi baldarî nimûneya ku tê de rêzika armancê di mînaka neyînî de tê pîp kirin an wan ji lûleya santrîfûjê dernexe. Pêdivî ye ku reaktîv an alav werin autoklav kirin da ku asîdên nukleîk ên heyî ji holê rakin, û divê hebûna enfeksiyonê bi ceribandinên kontrola neyînî were destnîşan kirin.
Cont Qirêjiya reaksiyonê —— Reagentan hilînin û li germahiyek nizm hilînin.
A-2 Serokwezîrr
■ Mg2+ konsantrasyon pir kêm e - —Bi rast Mg zêde bikin2+ konsantrasyon: Mg Optimize bikin2+ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn2+ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.
Design Sêwirana seretayî ya nerast, û rêzika armanc bi rêzika ne-hedef re homolojî heye. —— Serenavên ji nû ve sêwirandin.
Fenomena: Zencîreyên bihêzkirina PCR-ê bi mezinahiya ku tê hêvî kirin re nakok in, an mezin an piçûk, an carinan hem bandên zêdebûnê yên taybetî û hem jî bandên bihêzbûnê yên ne-taybetî çêdibin.
A-1 Destpêk
. Taybetmendiya seretayî ya belengaz
—— Serenavê ji nû ve sêwirandin.
Concentration Berhevkirina seretayî pir zêde ye ——Bi rast germahiya denaturasyonê zêde bikin û dema denaturationê dirêj bikin.
A-2 Mg2+ lisersekinî
■ The Mg2+ konsantrasyon pir zêde ye —— Bi rast Mîqdara Mg2+ kêm bikin: Mg xweş bikin2+ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn2+ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.
A-3 Thermostable polymerase
Amount Hejmara zêde ya enzîmê —— Mêjera enzîmê bi rêkûpêk bi navberên 0.5 U kêm bikin.
A-4 Germahiya Annealing
Temperature Germahiya germkirinê pir nizm e —— Bi guncanî germahiya germkirinê zêde bikin an jî rêbaza vekirina du-qonaxî bicîh bînin
Çerxên A-5 PCR
Many Zêde dewreyên PCR —— Hejmara dewreyên PCR kêm bikin.
A-1 Destpêk—— Taybetmendiya belengaz —— Destpêkê ji nû ve dîzayn bikin, cîh û dirêjahiya pêşîn biguhezînin ku taybetmendiya wê zêde bikin; an PCR -a hêlînkirî pêk bînin.
A-2 Temablon DNA
—— tempablon ne paqij e —— lateablon paqij bikin an DNA bi kîtên paqijkirinê derxînin.
A-3 Mg2+ lisersekinî
——Mg2+ konsantrasyon pir zêde ye —— Bi rast Mg kêm bikin2+ konsantrasyon: Mg Optimize bikin2+ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn2+ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.
A-4 dNTP
—— Kêmasiya dNTP -ê pir zêde ye —— Kêmasiya dNTP -ê bi guncan kêm bikin
A-5 Germahiya germkirinê
—— Germahiya vezelînê pir nizm —— Bi awayekî guncaw germahiya vezelînê zêde bikin
Çerxên A-6
—— Pir dewr —— Hejmara dewrê xweş bike
Gava yekem ev e ku hûn polîmeraza guncan hilbijêrin. Polîmeraza Taqê ya birêkûpêk ji ber nebûna çalakiya 3'-5 'exonukleazê nikare rast bike, û hevnegirî dê bandorkeriya dirêjkirina perçeyan pir kêm bike. Ji ber vê yekê, polîmeraza birêkûpêk a Taq nikare perçeyên armancê yên ji 5 kb mezintir bi bandor zêde bike. Polîmeraza Taq a bi guheztina taybetî an polimeraza din a dilsoziya bilind divê were hilbijartin da ku karîgeriya dirêjkirinê baştir bike û hewcedariyên amplifikasyona perçeyek dirêj bicîh bîne. Digel vê yekê, zêdekirina perçeyên dirêj jî pêdivî bi sererastkirina sêwirana seretayî, dema denaturation, dema dirêjkirinê, pH tampon, hwd. Ji bo ku pêşî li zirara şablonê were girtin, divê demjimêra guherînê di 94 ° C de ji bo çerxekê 30 sec an kêmtir were kêm kirin, û dema ku germahî heya 94 ° C berî zexmkirinê divê ji 1 min kêmtir be. Wekî din, sazkirina germahiya dirêjkirinê li dor 68 ° C û sêwirandina dema dirêjkirinê li gorî rêjeya 1 kb/min dikare amplifikasyona bi bandor a perçeyên dirêj misoger bike.
Rêjeya çewtiya zêdebûna PCR dikare bi karanîna polimerazên cihêreng ên DNA -yê bi dilsoziyek bilind were kêm kirin. Di nav hemî polimerazên Taq DNA yên ku heya nuha hatine dîtin de, enzima Pfu rêjeya xeletiya herî kêm û dilsoziya herî zêde heye (li tabloya pêvekirî binêre). Digel vebijarka enzîmê, lêkolîner dikarin bi xweşkirina şert û mercên reaksiyonê, rêjeya mutasyona PCR jî kêm bikin, di nav de xweşbînkirina berhevoka tampon, giraniya polîmeraza thermostable û xweşkirina jimara PCR.
Ji damezrandina xwe ve, kargeha me bi rêzgirtina prensîbê re hilberên çîna yekem ên cîhanê pêşve xist
kalîteya yekem. Berhemên me di pîşesaziyê de navûdengê hêja û di nav xerîdarên nû û kevn de pêbaweriyek hêja wergirtiye ..