2 × Pfu PCR Mix

Ultra-paqij dilsoziya bilind Taq DNA polimerazê.

Pfu DNA Polymerase ji E.coli bi klona Pyrococus Furiosis DNA Polymerase ya klonkirî tê vegotin û bi paqijkirina stûnê ya pirjimar tê paqij kirin û veqetandin. Ji ber ku Pfu 3′-5 ′ çalakiya exonukleazê heye, ew dikare di pêvajoya amplifikasyona DNA de sererast bike, dema ku Taq ADN Polymerase ya kevneşopî nikare. Her çend polimerazên din ên Taq DNA yên wekî Vent, Deep Vent, Tli, UITma, hwd fonksiyonên verastkirinê hene, Pfu di nav hemî polimerazên Taq DNA yên ku heya nuha hatine dîtin de rêjeya nehevsengiya herî kêm heye. Pfu DNA Polymerase ji polîmeraza Taq DNA ya hevbeş aramiya germê çêtir heye, û ew dikare zêdetirî% 90 çalakiyê li 95 ° C 1 demjimêran bidomîne.

Yek-tub Pfu PCR Mix (Sertîfîkaya Hilbera Teknîkî ya Neteweyî)

■ Pfu PCR Mix taybetmendî û hesasiyeta reaksiyona PCR çêtir kiriye û dikare şablonên tevlihev ên bi naveroka GC -ya bilind, avahiya duyemîn û yên wekî wan zêde bike. Bi qasî 2 nusxeyên şablona mebest dikarin werin zêdekirin, encamên ezmûnî yên rasttir misoger dikin.

Formula Formula bêhempa ya Pfu MasterMix tevahiya pergala reaksiyonê pir aram dike, û çalakî dê ji ber serma-qelandin an hilanîna demdirêj a li 4 ° C bandor neke.

Solution Çareseriya têkel a PCR ya pêş-amade û bikêr û bikêr dikare operasyonê zû û hêsan bike, giraniya kedê û xeletiya mînakkirinê pir kêm bike. Pêşkêşker û xweşbîniya PCR-ya bi performansa bilind jî di nav tevliheviyê de ne, ku hewcedariyên li ser mercên PCR kêm dike.

■ Di vê hilberê de hem pergalên ku tê de reng û hem jî boyax hene hene. Berhemên PCR Mix-ên ku xwedî boyax in dikarin rasterast piştî PCR-ê, bêyî ku tamponek mînak lê zêde bikin, bi elektroforekî werin lêkirin.

Pisîk. Na	Packing Size
4992780	1ml
4992781	5*1ml
4992782	1ml
4992906	5*1ml

E -nameyê ji me re bişînin

Berfirehiya Hilberê

Workflow

FAQ

Tags Product

Danasîna Çalakiyê

Çalakiya 1 yekîneya (U) Pfu DNA Polymerase wekî mîqdara enzîmê ku tê de 10 nmol deoksînukleotîdên ku di nav asîdê de nayên çareser kirin di 74 ° C de di nav 30 hûrdeman de bi karanîna DNA sperma salmonê aktîfkirî wekî şablon/destpêk tê destnîşan kirin.

Kontrolkirina Kalîteyê

Paqijiya bi tespîtkirina SDS-PAGE ji%99 zêdetir e; Na çalakîya nukelese ya xerîbkî tesbît beno; Di genoma mirovan de genê yek-kopî bi bandor dikare were zêdekirin; Dema ku yek hefte li germahiya odeyê were hilanîn çalakîyek girîng nayê guheztin.

Parametreyên Teknîkî yên Sereke

Çalakiya wê 3′-5 ′ exonukleazê û çalakiya wê 5′-3 ′ exonukleazê tune. Leza dirêjkirina zêdekirina DNA ji ya Taq polîmerazê kêmtir e, û bi gelemperî leza dirêjkirina enzima Pfu 0.5-1 kb e. Stabîliya germî ya Pfu ji Taq çêtir e. Ji bo şablonên bi naveroka GC -ya bilind, germahiya denaturasyonê dikare li 98 ° C were zêdekirin, ku bandorek wê li ser çalakiya Pfu polimerazê tune. Hilbera PCR-ê xalî ye, ku dikare bi pêlên 3'-dA ve were lê zêde kirin berî ku bi vektora TA ve were girêdan an bi vektora xalîçandî ve were klon kirin

Applications

Ew dikare ji bo zêdekirina dilsoziya bilind a DNA-yê, wekî klonkirina vegotina genê, mutasyona derhêneriya malperê, analîza polymorfîzma yek nucleotide (SNP) û tamîrkirina dawiyê were bikar anîn.

Hemî hilber dikarin ji bo ODM/OEM -ê bêne xweş kirin. Ji bo hûragahiyan,Ji kerema xwe Xizmeta Taybetkirî (ODM/OEM) bikirtînin

Pêşî: Kitêba Mutagenesîs a Serhêl a Malperê

Piştî: Ultra HiFidelity PCR Kit

DNA -ya genomîkî wekî şablon bikar bînin ku perçeyek 1kb zêde bikin.
Piştî reaksiyona PCR, ji bo tespîtkirina electrophoresis 5 μl bigirin.

Q: Zencîreyên zêdekirinê tune

A-1 pablon

■ Di şablonê de qirêjiyên proteînê an astengkerên Taq, û hwd hene. —— lateablona DNA paqij bikin, qirêjiyên proteînê rakin an DNA şablonê bi kîtên paqijkirinê derxînin.

■ Denaturkirina şablonê ne temam e —— Bi guncanî germahiya denaturasyonê zêde bike û dema denaturationê dirêj bike.

Deg Xerabkirina şablonê —— theablon ji nû ve amade bikin.

A-2 Destpêk

Quality Kalîteya nebaş a destpêkan-—Pêşînokê ji nû ve sentez bikin.

Deg Hilweşîna seretayî —— Ji bo parastinê serekên berhevkirî yên bilind bihejmêrin. Ji cemidandin û cemidandina pirjimar an jî dirêj-dirêj 4 ° C sarincokê biparêzin.

Design Sêwirana ne rast a destpêkan (mînak. Dirêjahiya destpêkerê têrê nake, dimer di navbera destpêkan de çêdibe, hwd.)

A-3 Mg²⁺lisersekinî

■ Mg²⁺ konsantrasyon pir kêm e - —Bi rast Mg zêde bikin²⁺konsantrasyon: Mg Optimize bikin²⁺ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn²⁺ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.

A-4 Germahiya Annealing

Temperature Germahiya bilind alandinê bandorê li girêdana destpêk û şablonê dike. —— Germahiya anînê kêm bikin û bi germahiyek 2 ° C şertê xweş bikin.

A-5 Dema dirêjkirinê

Extension Demjimêra dirêjkirina kurt —— Dema dirêjkirinê zêde bikin.

Pirs: Erênî derewîn

Fenomen: Nimûneyên neyînî jî bendên rêzika hedef nîşan didin.

A-1 Qirêjiya PCR

Cont Qirêjiya rêzika hedef an hilberên zêdekirinê —— Bi baldarî nimûneya ku tê de rêzika armancê di mînaka neyînî de tê pîp kirin an wan ji lûleya santrîfûjê dernexe. Pêdivî ye ku reaktîv an alav werin autoklav kirin da ku asîdên nukleîk ên heyî ji holê rakin, û divê hebûna enfeksiyonê bi ceribandinên kontrola neyînî were destnîşan kirin.

Cont Qirêjiya reaksiyonê —— Reagentan hilînin û li germahiyek nizm hilînin.

A-2 Serokwezîrr

■ Mg²⁺ konsantrasyon pir kêm e - —Bi rast Mg zêde bikin²⁺ konsantrasyon: Mg Optimize bikin²⁺ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn²⁺ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.

Design Sêwirana seretayî ya nerast, û rêzika armanc bi rêzika ne-hedef re homolojî heye. —— Serenavên ji nû ve sêwirandin.

Q: Zêdekirina ne-taybetî

Fenomena: Zencîreyên bihêzkirina PCR-ê bi mezinahiya ku tê hêvî kirin re nakok in, an mezin an piçûk, an carinan hem bandên zêdebûnê yên taybetî û hem jî bandên bihêzbûnê yên ne-taybetî çêdibin.

A-1 Destpêk

. Taybetmendiya seretayî ya belengaz

—— Serenavê ji nû ve sêwirandin.

Concentration Berhevkirina seretayî pir zêde ye ——Bi rast germahiya denaturasyonê zêde bikin û dema denaturationê dirêj bikin.

A-2 Mg²⁺ lisersekinî

■ The Mg²⁺ konsantrasyon pir zêde ye —— Bi rast Mîqdara Mg2+ kêm bikin: Mg xweş bikin²⁺ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn²⁺ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.

A-3 Thermostable polymerase

Amount Hejmara zêde ya enzîmê —— Mêjera enzîmê bi rêkûpêk bi navberên 0.5 U kêm bikin.

A-4 Germahiya Annealing

Temperature Germahiya germkirinê pir nizm e —— Bi guncanî germahiya germkirinê zêde bikin an jî rêbaza vekirina du-qonaxî bicîh bînin

Çerxên A-5 PCR

Many Zêde dewreyên PCR —— Hejmara dewreyên PCR kêm bikin.

Q: Bendikên pêçandî an şilandî

A-1 Destpêk—— Taybetmendiya belengaz —— Destpêkê ji nû ve dîzayn bikin, cîh û dirêjahiya pêşîn biguhezînin ku taybetmendiya wê zêde bikin; an PCR -a hêlînkirî pêk bînin.

A-2 Temablon DNA

—— tempablon ne paqij e —— lateablon paqij bikin an DNA bi kîtên paqijkirinê derxînin.

A-3 Mg²⁺ lisersekinî

——Mg²⁺ konsantrasyon pir zêde ye —— Bi rast Mg kêm bikin²⁺ konsantrasyon: Mg Optimize bikin²⁺ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn²⁺ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.

A-4 dNTP

—— Kêmasiya dNTP -ê pir zêde ye —— Kêmasiya dNTP -ê bi guncan kêm bikin

A-5 Germahiya germkirinê

—— Germahiya vezelînê pir nizm —— Bi awayekî guncaw germahiya vezelînê zêde bikin

Çerxên A-6

—— Pir dewr —— Hejmara dewrê xweş bike

Q: Di pergala reaksiyona PCR ya 50 μl de divê çiqas DNA şablon were zêdekirin?

Q: Meriv çawa perçeyên dirêj dirêj dike?

Gava yekem ev e ku hûn polîmeraza guncan hilbijêrin. Polîmeraza Taqê ya birêkûpêk ji ber nebûna çalakiya 3'-5 'exonukleazê nikare rast bike, û hevnegirî dê bandorkeriya dirêjkirina perçeyan pir kêm bike. Ji ber vê yekê, polîmeraza birêkûpêk a Taq nikare perçeyên armancê yên ji 5 kb mezintir bi bandor zêde bike. Polîmeraza Taq a bi guheztina taybetî an polimeraza din a dilsoziya bilind divê were hilbijartin da ku karîgeriya dirêjkirinê baştir bike û hewcedariyên amplifikasyona perçeyek dirêj bicîh bîne. Digel vê yekê, zêdekirina perçeyên dirêj jî pêdivî bi sererastkirina sêwirana seretayî, dema denaturation, dema dirêjkirinê, pH tampon, hwd. Ji bo ku pêşî li zirara şablonê were girtin, divê demjimêra guherînê di 94 ° C de ji bo çerxekê 30 sec an kêmtir were kêm kirin, û dema ku germahî heya 94 ° C berî zexmkirinê divê ji 1 min kêmtir be. Wekî din, sazkirina germahiya dirêjkirinê li dor 68 ° C û sêwirandina dema dirêjkirinê li gorî rêjeya 1 kb/min dikare amplifikasyona bi bandor a perçeyên dirêj misoger bike.

Q: Meriv çawa dilsoziya amplifikasyona PCR baştir dike?

Rêjeya çewtiya zêdebûna PCR dikare bi karanîna polimerazên cihêreng ên DNA -yê bi dilsoziyek bilind were kêm kirin. Di nav hemî polimerazên Taq DNA yên ku heya nuha hatine dîtin de, enzima Pfu rêjeya xeletiya herî kêm û dilsoziya herî zêde heye (li tabloya pêvekirî binêre). Digel vebijarka enzîmê, lêkolîner dikarin bi xweşkirina şert û mercên reaksiyonê, rêjeya mutasyona PCR jî kêm bikin, di nav de xweşbînkirina berhevoka tampon, giraniya polîmeraza thermostable û xweşkirina jimara PCR.

Peyama xwe li vir binivîsin û ji me re bişînin