Kit Direct PCR Xwîn

Zêdekirina bilez a genê mebest rasterast xwînê wekî şablon bêyî derxistinê bikar tîne.

Ev kîtek antî-înhîbîtorek DNA-polimerazê ya ku ji hêla genetîkî ve hatî çêkirin pejirandiye da ku genên yek-kopî yên di genoma mirovan de bi bandor zêde bike. Pergala tampon a xweş xweşkirî ya di vê kîtê de dibe alîkar ku polîmeraza bi xurtî li hember astengkirina astengkerên PCR bisekine, bi vî rengî dikare rasterast DNA -ê bi karanîna xwîn û şaneyên çandî wekî şablon xurt bike. Xebatkirina vê hilberê hêsan e û ne hewceyê gavên tevlihev ên wekî paqijkirina DNA an pêşîlêgirtina nimûneyê ye.
Ev kîtek wekî 2 × MasterMix tê peyda kirin, û reaksiyon dikare bi tenê şablona xwînê û destpêkên tespîtkirina pêwendîdar were zêdekirin. Ew dikare li ser şaneyên çandî yên mamikan wek mirov, mişk, beraz, dewar û cureyên din, û hem jî xwîna teze an 4 ℃ cryoper parastî, antîkagulant (EDTA, sîtrat, heparîn), pêlên xwînê yên liqandî û lekeyên xwîna hişk were sepandin. li ser qertên bazirganî yên Whatman 903 û FTA Elute têne hilanîn.

Pisîk. Na	Packing Size
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

E -nameyê ji me re bişînin

Berfirehiya Hilberê

Mînaka Ceribandinê

FAQ

Tags Product

Taybetmendî

■ Hêsan û bilez: Zêdekirina PCR dikare rasterast bi karanîna xwînê wekî şablon, bêyî hewcedariya gavên bêzar ên amadekirina nimûneyê û derxistina DNA were kirin.
Pur Paqijiya bilind: Derbasbûna pêş-dermankirinê û gavên derxistina DNA dikare bibe alîkar ku meriv ji pêgirtina xaçê ya mînakan dûr bikeve.
Through Berfirehiya bilind: Nasnameya PCR-ya ji bo nimûneyên mezin dikare bi tevlihevkirina kîtekê bi plakên PCR-yên 96/384-baş pêk were.
Univers Gerdûnîbûna bihêz: Ev kîtek dikare bi perçebûyî perçeyên GC -yên bilind an perçeyên bi struktura duyemîn a tevlihev xurt bike, û dirêjahiya amplifikasyonê heya 5 kb be.
Resistance Berxwedana stresê ya bihêz: Ev kît dikare ji bo celeb û nimûneyên xwînê yên ku bi awayên cihê têne parastin were sepandin.

Applications

Berhemên PCR-ê yên vê kîtê di 3′-dawiya "A" de heye, ku rasterast dikare ji bo klonkirina vektora TA were bikar anîn. Ev kît dikare ji bo zêdekirina perçeyên DNA-ya genomîkî, analîzên genetîkî yên bi destkeftiyek bilind û analîzkirina genotyping (mînakî tespîtkirina genê) were bikar anîn.

Hemî hilber dikarin ji bo ODM/OEM -ê bêne xweş kirin. Ji bo hûragahiyan,Ji kerema xwe Xizmeta Taybetkirî (ODM/OEM) bikirtînin

Pêşî: TIANcombi DNA Lyse & Det PCR Kit

Piştî: Mişk Tisê Rast PCR Kit

	Bikaranîna antîkagulasyona EDTA -ya mirovî wekî şablonek, 4 genên bi naverokên GC yên cihêreng ji hêla Xwîn Direct PCR Kit ve hatin zêdekirin. Pergala berteka PCR 20 μl bû, û 1 μl xwîn wekî şablon hate bikar anîn. M: TIANGEN Nîşan II; 1: Mezinahiya perçeyê 1090 bp, naveroka GC 68.1%; 2: Mezinahiya perçeyê 1915 bp, naveroka GC 70.4%; 3: Mezinahiya perçeyê 448 bp, naveroka GC 74.8%; 4: Mezinahiya perçeyê 1527 bp, naveroka GC 61.5%. Encamên ezmûnî: Xwîna Rasterast PCR Kit dikare bi bandor perçeyên DNA-yê bi naveroka GC-yê di navbêna 61.5%-74.8%de zêde bike, pêşniyar dike ku ew karibe perçeyên bilind-GC zêde bike.
	Bikaranîna antîkagulasyona EDTA -ya mirovî wekî şablon, 5 genên bi dirêjahiya cihêreng (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 û Hn4.0) ji hêla Xwîn Direct PCR Kit ve hatin zêdekirin. Pergala berteka PCR 20 μl bû, û 1 μl xwîn wekî şablon hate bikar anîn. M: TIANGEN Nîşan II; 1-3: 3 nimûneyên xwînê yên cihêreng; NTC: kontrol bêyî seretayan. Encamên ezmûnî: Xwîn PCR Kit Direct dikare perçeyên bi dirêjahiya 4 kb dirêj bike, pêşniyar dike ku ew dikare perçeyên dirêj zêde bike.
	Bikaranîna antîkagulasyona EDTA -ya mirovî wekî şablon, Xwîn Direct PCR Kit ji bo tespîtkirina nimûneyên xwînê yên cihêreng ên PCR -ê hate bikar anîn. Pergala berteka PCR 20 μl bû, û 1 μl xwîn wekî şablon hate bikar anîn. M: TIANGEN Nîşan II; 1-9: mîqdara barkirina xwînê bi rêzê 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl û 5 μl e, NTC: bêyî şablonê kontrol bikin Encamên ezmûnî: Xwîna Rasterast PCR Kit ji xwînê re berxwedanek xurt heye û dikare bi navgîniya barkirinê ya 0.1-5 μl nimûneyên xwînê zêde bike.
	Nimûneyên xwînê yên ji mirovan, xezalan, mirîşkan û cureyên din ên bi dermankirinên cihêreng wekî şablon hatin bikar anîn. Kit Direct PCR ya Xwînê ji bo zêdekirina PRNP (mirov, 750 bp), Actin (rat, 200 bp), û β-Actin (Mirîşk, 1.0 kb) hate bikar anîn. Pergala berteka PCR 20 μl bû, û 1 μl xwîn wekî şablon hate bikar anîn. M: TIANGEN Nîşan II. Encamên ezmûnî: Xwîna Rasterast PCR Kit dikare li ser cûrbecûr mînakan were sepandin, û tespîtkirina PCR rasterast dikare li ser nimûneyên xwînê yên ji cûrbecûr cûrbecûr bi dermankirinên cihêreng were kirin.

Q: Zencîreyên zêdekirinê tune

A-1 pablon

■ Di şablonê de qirêjiyên proteînê an astengkerên Taq, û hwd hene. —— lateablona DNA paqij bikin, qirêjiyên proteînê rakin an DNA şablonê bi kîtên paqijkirinê derxînin.

■ Denaturkirina şablonê ne temam e —— Bi guncanî germahiya denaturasyonê zêde bike û dema denaturationê dirêj bike.

Deg Xerabkirina şablonê —— theablon ji nû ve amade bikin.

A-2 Destpêk

Quality Kalîteya nebaş a destpêkan-—Pêşînokê ji nû ve sentez bikin.

Deg Hilweşîna seretayî —— Ji bo parastinê serekên berhevkirî yên bilind bihejmêrin. Ji cemidandin û cemidandina pirjimar an jî dirêj-dirêj 4 ° C sarincokê biparêzin.

Design Sêwirana ne rast a destpêkan (mînak. Dirêjahiya destpêkerê têrê nake, dimer di navbera destpêkan de çêdibe, hwd.)

A-3 Mg²⁺lisersekinî

■ Mg²⁺ konsantrasyon pir kêm e - —Bi rast Mg zêde bikin²⁺konsantrasyon: Mg Optimize bikin²⁺ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn²⁺ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.

A-4 Germahiya Annealing

Temperature Germahiya bilind alandinê bandorê li girêdana destpêk û şablonê dike. —— Germahiya anînê kêm bikin û bi germahiyek 2 ° C şertê xweş bikin.

A-5 Dema dirêjkirinê

Extension Demjimêra dirêjkirina kurt —— Dema dirêjkirinê zêde bikin.

Pirs: Erênî derewîn

Fenomen: Nimûneyên neyînî jî bendên rêzika hedef nîşan didin.

A-1 Qirêjiya PCR

Cont Qirêjiya rêzika hedef an hilberên zêdekirinê —— Bi baldarî nimûneya ku tê de rêzika armancê di mînaka neyînî de tê pîp kirin an wan ji lûleya santrîfûjê dernexe. Pêdivî ye ku reaktîv an alav werin autoklav kirin da ku asîdên nukleîk ên heyî ji holê rakin, û divê hebûna enfeksiyonê bi ceribandinên kontrola neyînî were destnîşan kirin.

Cont Qirêjiya reaksiyonê —— Reagentan hilînin û li germahiyek nizm hilînin.

A-2 Serokwezîrr

■ Mg²⁺ konsantrasyon pir kêm e - —Bi rast Mg zêde bikin²⁺ konsantrasyon: Mg Optimize bikin²⁺ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn²⁺ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.

Design Sêwirana seretayî ya nerast, û rêzika armanc bi rêzika ne-hedef re homolojî heye. —— Serenavên ji nû ve sêwirandin.

Q: Zêdekirina ne-taybetî

Fenomena: Zencîreyên bihêzkirina PCR-ê bi mezinahiya ku tê hêvî kirin re nakok in, an mezin an piçûk, an carinan hem bandên zêdebûnê yên taybetî û hem jî bandên bihêzbûnê yên ne-taybetî çêdibin.

A-1 Destpêk

. Taybetmendiya seretayî ya belengaz

—— Serenavê ji nû ve sêwirandin.

Concentration Berhevkirina seretayî pir zêde ye ——Bi rast germahiya denaturasyonê zêde bikin û dema denaturationê dirêj bikin.

A-2 Mg²⁺ lisersekinî

■ The Mg²⁺ konsantrasyon pir zêde ye —— Bi rast Mîqdara Mg2+ kêm bikin: Mg xweş bikin²⁺ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn²⁺ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.

A-3 Thermostable polymerase

Amount Hejmara zêde ya enzîmê —— Mêjera enzîmê bi rêkûpêk bi navberên 0.5 U kêm bikin.

A-4 Germahiya Annealing

Temperature Germahiya germkirinê pir nizm e —— Bi guncanî germahiya germkirinê zêde bikin an jî rêbaza vekirina du-qonaxî bicîh bînin

Çerxên A-5 PCR

Many Zêde dewreyên PCR —— Hejmara dewreyên PCR kêm bikin.

Q: Bendikên pêçandî an şilandî

A-1 Destpêk—— Taybetmendiya belengaz —— Destpêkê ji nû ve dîzayn bikin, cîh û dirêjahiya pêşîn biguhezînin ku taybetmendiya wê zêde bikin; an PCR -a hêlînkirî pêk bînin.

A-2 Temablon DNA

—— tempablon ne paqij e —— lateablon paqij bikin an DNA bi kîtên paqijkirinê derxînin.

A-3 Mg²⁺ lisersekinî

——Mg²⁺ konsantrasyon pir zêde ye —— Bi rast Mg kêm bikin²⁺ konsantrasyon: Mg Optimize bikin²⁺ kombûna bi rêze reaksiyonên ji 1 mM heta 3 mM bi navberek 0.5 mM ji bo diyarkirina Mg ya çêtirîn²⁺ berhevkirina ji bo her şablon û destpêk.

A-4 dNTP

—— Kêmasiya dNTP -ê pir zêde ye —— Kêmasiya dNTP -ê bi guncan kêm bikin

A-5 Germahiya germkirinê

—— Germahiya vezelînê pir nizm —— Bi awayekî guncaw germahiya vezelînê zêde bikin

Çerxên A-6

—— Pir dewr —— Hejmara dewrê xweş bike

Q: Di pergala reaksiyona PCR ya 50 μl de divê çiqas DNA şablon were zêdekirin?

Q: Meriv çawa perçeyên dirêj dirêj dike?

Gava yekem ev e ku hûn polîmeraza guncan hilbijêrin. Polîmeraza Taqê ya birêkûpêk ji ber nebûna çalakiya 3'-5 'exonukleazê nikare rast bike, û hevnegirî dê bandorkeriya dirêjkirina perçeyan pir kêm bike. Ji ber vê yekê, polîmeraza birêkûpêk a Taq nikare perçeyên armancê yên ji 5 kb mezintir bi bandor zêde bike. Polîmeraza Taq a bi guheztina taybetî an polimeraza din a dilsoziya bilind divê were hilbijartin da ku karîgeriya dirêjkirinê baştir bike û hewcedariyên amplifikasyona perçeyek dirêj bicîh bîne. Digel vê yekê, zêdekirina perçeyên dirêj jî pêdivî bi sererastkirina sêwirana seretayî, dema denaturation, dema dirêjkirinê, pH tampon, hwd. Ji bo ku pêşî li zirara şablonê were girtin, divê demjimêra guherînê di 94 ° C de ji bo çerxekê 30 sec an kêmtir were kêm kirin, û dema ku germahî heya 94 ° C berî zexmkirinê divê ji 1 min kêmtir be. Wekî din, sazkirina germahiya dirêjkirinê li dor 68 ° C û sêwirandina dema dirêjkirinê li gorî rêjeya 1 kb/min dikare amplifikasyona bi bandor a perçeyên dirêj misoger bike.

Q: Meriv çawa dilsoziya amplifikasyona PCR baştir dike?

Rêjeya çewtiya zêdebûna PCR dikare bi karanîna polimerazên cihêreng ên DNA -yê bi dilsoziyek bilind were kêm kirin. Di nav hemî polimerazên Taq DNA yên ku heya nuha hatine dîtin de, enzima Pfu rêjeya xeletiya herî kêm û dilsoziya herî zêde heye (li tabloya pêvekirî binêre). Digel vebijarka enzîmê, lêkolîner dikarin bi xweşkirina şert û mercên reaksiyonê, rêjeya mutasyona PCR jî kêm bikin, di nav de xweşbînkirina berhevoka tampon, giraniya polîmeraza thermostable û xweşkirina jimara PCR.

Peyama xwe li vir binivîsin û ji me re bişînin